Maaalit:
* Öljymaalit: Holbein käytti pääasiassa öljyvärejä, joiden ansiosta hän pystyi luomaan täyteläisiä, eloisia värejä ja hienovaraisia vivahteita ihon sävyihin. Hänet tunnettiin tarkasta ja huolellisesta siveltimestä, joka vangitsi yksityiskohdat huomattavan tarkasti.
* Lämpö: Vaikka Holbein käytti pääasiassa öljyä, hän käytti toisinaan temperaa pohjamaalaukseen tai erityisiin efekteihin. Tempera, maali, joka on valmistettu pigmentillä sekoitettuna munankeltuaiseen, mahdollisti tasaisemman, vähemmän kiiltävän lopputuloksen kuin öljymaali.
Tuet:
* Puulevyt: Suurin osa Holbeinin maalauksista tehtiin puupaneeleille. Hän valmisteli paneelit huolellisesti varmistaen tasaisen ja vakaan pinnan maalin levittämistä varten.
* Kanvas: Hän käytti ajoittain myös kangasta, erityisesti suurempiin tai julkiseen näytteilleasetuksiin tarkoitettuihin teoksiin.
Muut materiaalit:
* Kultalehti: Holbein käytti usein lehtikultaa koriste-elementeissä, taustoissa tai vaatteissa, mikä lisäsi ripauksen ylellisyyttä ja kirkkautta.
* Hopeapiste: Alustavissa luonnoksissa ja alapiirustuksissa Holbein käytti toisinaan hopeapistettä, tekniikkaa, joka tuotti herkkiä viivoja valmisteltuun paperiin.
* Muste: Mustetta käytettiin yksityiskohtiin, kuoriutumiseen ja terävien linjojen luomiseen hänen piirustuksissaan ja toisinaan ääriviivoja maalauksissaan.
* Chiili: Hiiltä käytettiin myös alustavissa luonnoksissa ja alapiirustuksissa.
Tarkkoja esimerkkejä hänen työnsä materiaaleista:
* Ambassadors (1533): Öljy tammilevylle, kultaisia lehtiä.
* Henry VIII:n muotokuva (1536): Öljy tammilevylle, hopeanpunainen pohjapiirros.
* Erasmus Rotterdamilaisen muotokuva (1523): Öljy tammilevylle, kultaisia lehtiä.
Holbeinin näiden materiaalien hallinta antoi hänelle mahdollisuuden luoda todenmukaisia ja yksityiskohtaisia muotokuvia, jotka vangitsivat kohteidensa persoonallisuudet ja monimutkaisuudet hämmästyttävän tarkasti. Hän käytti myös innovatiivisia tekniikoita, kuten perspektiivin ja chiaroscuron käyttöä (valon ja varjon käyttö), luodakseen realistisuuden ja syvyyden tunteen maalauksissaan.