Kirby-Bauer-tekniikka on standardi mikrobiologinen menetelmä, jota käytetään määrittämään bakteerien herkkyys antimikrobisille aineille. Se sisältää bakteerikasvun estoalueen mittaamisen antibiootilla kyllästettyjen kiekkojen ympäriltä, jotka on asetettu testiorganismilla siirrostettuun agarlevyyn. Tässä ovat Kirby-Bauer-tekniikan yleiset vaiheet:
1. Inokulaatin valmistus :
- Testattavasta bakteerikannasta saadaan puhdas viljelmä ja sitä kasvatetaan sopivassa liemiviljelyväliaineessa logaritmisen kasvuvaiheen (sameuden) saavuttamiseksi.
- Bakteerisuspensio on standardoitu tiettyyn sameuteen, joka vastaa tyypillisesti 0,5 McFarlandin sameusstandardia, jotta varmistetaan tasainen siirrostetiheys.
2. Agar-levyn ymppäys :
- Testissä käytetään steriilejä agarmaljoja, jotka sisältävät Mueller-Hinton-agaria tai muuta sopivaa agar-elatusainetta.
- Standardoitu siirroste levitetään tasaisesti agarlevyn pinnalle steriilillä pumpulipuikolla bakteerikasvulle yhtenäisen nurmikon luomiseksi.
- Inokuloidun levyn annetaan kuivua muutaman minuutin ajan ylimääräisen kosteuden imemiseksi.
3. Antibioottilevyjen käyttö :
- Agar-levyn pinnalle asetetaan tasaisin välein steriilejä antibioottilevyjä, jotka sisältävät tiettyjä pitoisuuksia antimikrobisia aineita, käyttäen steriilejä pihtejä tai kiekkoannostelijaa.
- Kiekkoja painetaan kevyesti, jotta varmistetaan hyvä kosketus agar-pinnan kanssa levyjä vahingoittamatta.
4. Inkubointi :
- Antibioottilevyillä siirrostettua levyä inkuboidaan sopivassa lämpötilassa (yleensä 35-37 °C) tietyn ajan (tyypillisesti 16-24 tuntia) bakteerien kasvun ja antimikrobisten aineiden diffuusion mahdollistamiseksi.
5. Estoalueiden mittaus :
- Inkuboinnin jälkeen levyt tutkitaan antibioottilevyjen ympärillä olevien estoalueiden esiintymisen varalta.
- Kunkin estoalueen halkaisija mitataan millimetreinä viivaimella tai digitaalisella jarrusatulalla.
- Vyöhykkeen halkaisija ilmaisee testiorganismin herkkyyden tietylle antibiootille.
6. Tulosten tulkinta :
- Mitattuja vyöhykkeiden halkaisijoita verrataan standardoituihin taulukoihin tai ohjeisiin, kuten Clinical and Laboratory Standards Instituten (CLSI) toimittamiin, testattavan organismin herkkyyden tai resistenssin määrittämiseksi testatuille antimikrobisille aineille.
- Organismit luokitellaan herkiksi, keskitasoiksi tai vastustuskykyisiksi estoalueiden koon ja vahvistettujen tulkintakriteerien perusteella.
7. Laadunvalvonta :
- Kirby-Bauer-tekniikan tarkkuuden ja luotettavuuden varmistamiseksi jokaiseen testierään sisällytetään laadunvalvontakantoja, joiden herkkyysmallit tunnetaan, jotta voidaan seurata menetelmän ja käytettyjen reagenssien suorituskykyä.
On tärkeää noudattaa standardoituja menetelmiä ja tulkita tuloksia vahvistettujen ohjeiden mukaisesti, jotta Kirby-Bauerin antibioottiherkkyystestistä saadaan luotettavaa ja kliinisesti merkityksellistä tietoa.