* Vihreä Goblin (Norman Osborn) :Tämä on pääpahis ja sitä voi pelata alusta alkaen.
* Uusi Goblin (Harry Osborn) :Avaat Harryn pelattavana hahmona suorittamalla pelin tarinatilan.
Pelissä ei ole muita pelattavia peikkoja.
On tärkeää huomata, että Spider-Man 3 (2007) on yksinpeli . Ei ole olemassa moninpelitiloja, joissa voit avata uusia hahmoja.