Matkallaan Despereaux ystävystyy viisaan rotan nimeltä Chiaroscuro, ihmispalvelijan nimeltä Miggery Sow ja sokean tytön nimeltä Antonia. Chiaroscuro auttaa Despereauxia ymmärtämään todellisen tarkoituksensa ja rohkaisee häntä olemaan rohkea. Miggery Sow auttaa Despereauxia navigoimaan ihmisten maailmassa ja antaa hänelle arvokkaita neuvoja. Antoniasta, jolla on vahva yhteys eläimiin, tulee Despereaux'n läheinen ystävä ja hän tukee häntä hänen etsinnöissään.
Despereaux, Chiaroscuro, Miggery ja Antonia lähtevät yhdessä vaaralliseen seikkailuun pelastaakseen prinsessan ja tuodakseen rauhan hiirten ja rottien välille. Matkan varrella he kohtaavat monia haasteita ja esteitä, mutta heidän päättäväisyytensä ja uskollisuutensa auttavat heitä voittamaan vastoinkäymiset.
"The Tale of Despereaux" on sydäntä lämmittävä ja inspiroiva tarina ystävyydestä, rohkeudesta ja todellisen identiteetin hyväksymisestä. Se korostaa erilaisuuden tärkeyttä, sillä usein ainutlaatuiset ominaisuudet tekevät meistä erityisiä ja kykeneviä suuriin asioihin.