Näytelmässä Macbeth Lady Macbethillä on ratkaiseva rooli kuningas Duncanin kuolemassa. Hän on se, joka saa Macbethin murhaamaan kuninkaan, ja hän auttaa häntä suunnittelemaan ja toteuttamaan teon.
Kun Macbeth on ilmaissut epäilyksensä ja pelkonsa kuninkaan tappamisesta, Lady Macbeth moittii häntä pelkuriksi ja häpeää häntä syyllistymään rikokseen. Hän huomauttaa, että hänellä on jo ollut ajatus tappaa Duncan ja että hän epäröi vain "heikkoutensa" vuoksi. Hän myös muistuttaa häntä hänen kunnianhimostaan tulla kuninkaaksi ja kertoo, että hänen on oltava armoton, jos hän haluaa saavuttaa tavoitteensa.
Lady Macbethin päättäväisyys ja manipulointi saa lopulta Macbethin suostumaan hänen suunnitelmaansa. Hän kertoo murhan yksityiskohdista, mukaan lukien kuinka ja milloin se pitäisi tehdä. Hän myös käskee Macbethia jättämään veriset tikarit Duncanin ruumiin viereen, jotta syyllisyys lankeaisi kuninkaan vartijoiden harteille.
Kun murha on tehty, Lady Macbeth uskoo aluksi, että he pystyvät peittämään sen. Pian hän kuitenkin alkaa näyttää syyllisyyden ja hulluuden merkkejä. Hänestä tulee pakkomielle käsiensä verestä, eikä hän voi nukkua. Hän alkaa myös nähdä näkyjä Duncanin haamusta, joka syyttää häntä murhasta.
Lady Macbethin syyllisyys muuttuu lopulta liian raskaaksi hänen kantaakseen. Hän kuolee näytelmän neljännessä näytöksessä, ja hänen kuolemansa on käännekohta Macbethille. Hänestä tulee vieläkin häikäilemätön ja tyrannimainen, ja lopulta hän menettää mielensä.
Lady Macbethin rooli kuningas Duncanin kuolemassa on merkittävä, koska se korostaa kunnianhimoa ja vaaroja, joita syntyy, kun halujen annetaan voittaa moraaliset periaatteensa. Hän on monimutkainen ja traaginen hahmo, joka lopulta tuhoutuu oman kunnianhimonsa ja syyllisyytensä vuoksi.